Presentazione del caso

Una donna di 43 anni con grave anemia in seguito a splenectomia precedentemente tipizzata come gruppo sanguigno A, Rh (D) negativo, è stata inviata al Laboratorio di Immunoematologia di Riferimento (IRL) dell’Organizzazione Iraniana per le Trasfusioni di Sangue (IBTO), Teheran, Iran per la tipizzazione ABO / Rh (D) e il test di screening degli anticorpi con una richiesta di due unità di RBC per la trasfusione nel dicembre 2013. L’anamnesi del paziente ha rivelato aborto ricorrente e aborto spontaneo senza storia di trasfusione di sangue. La sua storia familiare ha rivelato che i suoi genitori avevano un matrimonio consanguineo e lei aveva quattro fratelli, tutti vivi senza alcun disturbo del sangue sospetto, tranne uno dei fratelli che ha subito una splenectomia a causa di anemia sferocitosica ereditaria. Il suo unico figlio precedente era un ragazzo sano di quindici anni, che è stato tipizzato e non è stato confermato come fenotipo Rhnull. I parametri di coagulazione ed ematologia erano nella norma, tranne l’emoglobina molto bassa di 3,2 g/dl.

Si è osservato che il plasma del siero del paziente ha reagito fortemente nelle cellule del pannello anticorpale, dando 4 + macroscopico nella fase 37℃ e nella fase anti globulina umana. Il risultato del test di controllo automatico era negativo. Il test diretto antiglobulina (DAT) era positivo (1+) con differenziale anti- IgG negativo e anti-C3d positivo (1+).

Questi risultati suggerivano la presenza di alloanticorpi clinicamente significativi contro più antigeni negativi o un antigene ad alta prevalenza. Un risultato del test di screening degli anticorpi era negativo per il fratello del paziente. Per la procedura di screening anticorpale è stato utilizzato un pannello antigene a tre cellule disponibile in casa (IBTO mini-panel) in cui il plasma del paziente è stato aggiunto a RBC senza enzima papaina utilizzando la soluzione salina a bassa forza ionica (LISS). Il pannello IBTO mini-3 cellule e il kit di identificazione degli anticorpi 11 cellule e anche le cellule selezionate sono stati convalidati entro i due anni utilizzando i kit commerciali Diamed marcati CE. Il test di screening degli anticorpi è stato eseguito due volte in parallelo utilizzando i kit prodotti da IBTO e i kit Diamed. I risultati sono stati confrontati e, in caso di risultati positivi, il pannello ID anticorpo 11 cellule della società Diamed è stato utilizzato contemporaneamente al pannello ID anticorpo 11 cellule di IBTO. Il pannello ID anticorpale fatto in casa IBTO e le cellule selezionate sono stati utilizzati per escludere e includere gli alloanticorpi.

Per il test di screening degli anticorpi è stato utilizzato il metodo di agglutinazione su colonna con carta gel antiglobulina (INVITROGEL AHG coombs-Germania). Le carte gel sono state incubate a 37 °C per 15 minuti e poi centrifugate per 10 minuti. I metodi standard in provetta (Bio-Rad AHG- Germania) sono stati utilizzati per l’identificazione degli anticorpi e i test sulle cellule selezionate.

Gli alloanticorpi clinicamente significativi sono stati definiti come quegli anticorpi che potenzialmente potrebbero causare la distruzione di RBC in base alla reattività a 37 °C e/o alla fase anti globulina umana (AHG).

Il paziente e suo fratello esteso fenotipizzazione ha mostrato che erano negativi per D, C, E, c, e, antigeni RBC, indicando che erano fortemente sospetto di essere il raro Rhnull fenotipo.

Studi di assorbimento ed eluizione in Anti-human globulina (AHG, CE- Immunodiagnostika, Am Seerain 13 Germania, Eschelbronn) non ha rivelato la presenza di D, C, E, c, e, antigeni RBC nel sangue ottenuto da entrambi i pazienti. Abbiamo eseguito la fenotipizzazione Rh con due fonti di antisieri (Diagast 251/AV.AVINEE- 59120 Loos, Francia e CE- Immunodiagnostika, Am Seerain 13 Germania, Eschelbronn). I test di controllo positivi e negativi sono stati eseguiti per ogni antigene secondo le raccomandazioni del produttore. Sulla base di questi risultati collettivi, abbiamo interpretato questi risultati come fortemente suggestivi del fenotipo Rhnull con un anti-Rh29 clinicamente significativo identificato nel siero della paziente donna i cui dati sono riportati nella tabella 1.

I test di compatibilità hanno mostrato che il siero della paziente donna non era reattivo con suo fratello. Due unità di RBC sono state raccolte dal fratello in un periodo di 10 giorni. È stata trasfusa con le unità di RBC e non ha mai avuto bisogno di trasfusioni da quella data. Suo fratello ha donato altre due unità di RBC nel 2014 e nel 2015. Anche la crioconservazione è stata utilizzata per un uso futuro.