Case presentation

43歳女性、脾臓摘出後の重度の貧血で、血液型はA群、Rh（D）陰性と診断された方。 は、2013年12月に輸血用赤血球2単位の依頼を受け、ABO / Rh（D）タイピングと抗体スクリーニング検査のためにイラン輸血機関（IBTO）（テヘラン、イラン）の免疫血液学基準研究所（IRL）に紹介された。 患者の病歴は、流産と流産を繰り返しており、輸血の既往はない。 家族歴は、両親が血族結婚で、4人兄弟がいたが、兄弟のうち1人が遺伝性球状赤血球症貧血で脾臓摘出術を受けた以外は、血液疾患が疑われず、全員生存していることがわかった。 彼女の唯一の先住児は15歳の健康な少年で、型判定を行ったが、Rhnull表現型であることは確認されなかった。 ヘモグロビンが3.2 g/dLと非常に低いことを除けば、凝固および血液学的パラメータは正常範囲にあった。

患者の血清血漿は抗体パネル細胞で強く反応し，37℃相と抗ヒトグロブリン相で4＋マクロを与えることが観察された． Auto control testの結果は陰性であった。 Direct Anti-globulin Test（DAT）は陽性（1+）、鑑別は抗IgG陰性、抗C3d陽性（1+）であった。

これらの結果は、複数の陰性抗原または高頻度抗原に対する臨床的に重要な同種抗体の存在を示唆するものであった。 抗体スクリーニング検査の結果、患者の兄は陰性であった。 低イオン強度生理食塩水（LISS）を用いてパパイン酵素を含まない赤血球に患者の血漿を添加する抗体スクリーニング法には、自作の3細胞抗原パネル（IBTOミニパネル）を使用した。 IBTO mini-3cellパネルと抗体同定用11cellキット、および選択した細胞は、CEマークのついた市販のDiamedキットを用いて2年以内にバリデーションを行った。 抗体スクリーニング検査は、IBTO社製キットとDiamed社製キットを用いて並行して2回実施した。 その結果を比較し、陽性となった場合には、Diamed社製11cells抗体IDパネルをIBTO社製11cells抗体IDパネルと同時に使用しました。 IBTO自家製抗体IDパネルと選択細胞を用いてアロ抗体を除外し、含有させた。

抗体スクリーニング検査には抗グロブリンゲルカード（INVITROGEL AHG coombs-Germany）を用いたカラム凝集法を使用した。 ゲルカードは37℃で15分間インキュベートした後、10分間遠心分離した。 抗体の同定および選択された細胞の検査には、標準チューブ法（Bio-Rad AHG-ドイツ）を使用した。

臨床的に重要なアロ抗原は、37℃での反応性および/または抗ヒトグロブリン（AHG）相に基づいて、赤血球破壊を引き起こす可能性がある抗体と定義された。

患者とその弟の拡張フェノタイピングでは、D、C、E、c、eのRBC抗原は陰性であり、まれなRhnull表現型であることが強く疑われた。

抗ヒトグロブリン（AHG、CE- Immunodiagnostika, Am Seerain 13 Germany, Eschelbronn）の吸着・溶出試験でも両患者から得られた血液にはD、C、E、c、e、RBC抗原の存在は確認されなかった。 2種類の抗血清（Diagast 251/AV.AVINEE- 59120 Loos, FranceとCE- Immunodiagnostika, Am Seerain 13 Germany, Eschelbronn）を用いてRh表現型を実施しました。 陽性および陰性コントロールテストは、各抗原について製造元の推奨に従って実施した。 これらの結果を総合して、我々は、表1に示す女性患者の血清中に臨床的に有意な抗Rh29が同定され、Rhnull表現型を強く示唆するものと解釈した。