BEVEZETÉS

A joghurt a tej Lactobacillus spp.-vel történő erjesztésével előállított tejtermék. Napjainkban a joghurt terápiás, profilaktikus és táplálkozási tulajdonságai széles körben elfogadottak (Boor, 2001). Megfelelő mennyiségben adagolva a probiotikumok egészségügyi előnyöket nyújtanak a gazdaszervezetnek és növelik a mikrobiális egyensúlyt (Fuller, 1989; Guarner et al., 2005). A probiotikumok tehát élő, nem patogén, barátságos mikroorganizmusok, amelyek jótékony szerepet játszanak a gazdaszervezet mikroflórájában (Schrezenmeir és de Vrese, 2001). A tejsavbaktériumok (LAB) a mikroorganizmusok legfontosabb probiotikus csoportja, különösen a Lactobacillus sp., a Bifidobacterium sp. és az Enterococcous sp. (Klein és mtsai., 1998). A tejtermék diétás és terápiás tulajdonságait a probiotikus mikroorganizmusok határozzák meg (Boor, 2001).

A joghurt a probiotikus Lactobacillus spp. potenciális forrása. A joghurtot a leggazdagabb probiotikus fertőző élelmiszerként is ismerik. A tejtermék tápértékét a probiotikus mikroorganizmusok és az erjedés eredményeként keletkező metabolitok növelik. A joghurt rendszeres fogyasztása csökkenti a túlzott zsírt a májból és fokozza a kiválasztást. Azoknak is szükséges, akik szívbetegségben, érelmeszesedésben, magas vérnyomásban és gyulladásban szenvednek. A joghurt hatására kiválasztódó gyomornedv magas emésztési képességet eredményez. A probiotikus mikroorganizmusok jótékony hatása különösen a Lactobacillus sp., amely létezik a tejtermékekben, amely bizonyítékokat jelentett továbbá számos kutató tanulmányozta a probiotikus mikroorganizmusok hatását a patogén szervezetekkel szemben különböző módszerekkel (Mercenier et al., 2003).

A laktobacillusok a tejsavbaktériumok tagjai, amelyek elsődleges erjedési végterméke a tejsav. Kereskedelmi szempontból fontos baktériumok, amelyek “általánosan biztonságosnak elismert” (GRAS) státuszuknak köszönhetően széleskörűen alkalmazhatók mind az élelmiszeriparban, mind a nem élelmiszeriparban. A laktobacillusok molekuláris biológiáját széleskörűen tanulmányozták annak érdekében, hogy javítsák specifikus jótékony tulajdonságaikat (Pouwels és Leer, 1993).

A probiotikumok hatásmechanizmusa a probiotikus baktériumok azon képességén alapul, hogy a bélhámszövetben lévő kórokozókat megkötik. A probiotikumok antipatogén hatása a tejsav termeléséből áll, amely csökkenti a pH-t, kölcsönhatásba lép a kórokozók által termelt toxinokkal hidrogén-peroxid termelésével és bakteriocin szintézissel (Corcionivoschi et al., 2010).

A hatékony probiotikus termékhez szükséges a felhasznált baktériumfaj megfelelő azonosítása és jellemzése. A terápiás és táplálkozási szempontból hasznos probiotikus organizmusok kiválasztása specifikus tulajdonságok alapján történne (Fuller, 1989; Quewand és Vesterlund, 2004).

A kutatás célja Banglades különböző régióiból származó joghurtok gyűjtése és a laktobacillusok azonosítása bakteriológiai, valamint nemzetségspecifikus PCR segítségével, valamint a kórokozó baktériumok szaporodásának befolyásolását követően probiotikus tulajdonságaik elemzése volt.

MATERIALITÁS ÉS MÓDSZEREK

Mintagyűjtés és a tejsavbaktériumok (LAB) izolálása: Kétféle joghurtmintát gyűjtöttünk a bangladesi Chittagong és Bogra város különböző szupermarketjeiből, amelyek savanyú (M1, M2 és M3 minta) és édes (S2 minta) ízűek voltak. A mintákat a gyűjtés után azonnal alacsony hőmérsékletű (4°C) hűtőszekrényben aszeptikusan tárolták, hogy megóvják őket a szennyeződésektől és a romlástól. A Lactobacillus spp. izolálása a joghurtmintákból 0,9%-os sóoldattal történő megfelelő hígítással történt. Az MRS (Man, Rogosa és Sharpe) táptalajt és az MRS (Man, Rogosa és Sharpe) agar táptalajt használtuk a szervezet szaporítására. A táptalajok pH-értékét 6,5-re állítottuk be. A lemezeket 37 °C-on 48 órán át aerob módon inkubáltuk. Végül a Lactobacillus egyetlen kolóniáját a kolónia morfológiájának megfigyelésével és néhány biokémiai teszttel, például gramfestéssel, kataláz- és oxidáz-teszttel izoláltuk. A jól izolált kolóniákat felszedtük, és a Lactobacillus dúsításához 37°C-on MRS-lébe vittük át.

A tejsavbaktériumok (LAB) azonosítása bakteriológiai elemzéssel: Az azonosítás a Bergey-féle szisztémás bakteriológiai kézikönyvben leírt módszerek szerint történt. Anaerob körülmények alkalmazása nélkül minden törzs jól növekedett MRS agaron 37°C-on 48 órán keresztül a laktobacillusok szelektív elszaporodásához. A megfelelő hígításokból egy reprezentatív kolóniát választottunk ki, és a Gram-festési reakció, a kolónia megjelenése, a sejtmorfológia, a kataláz teszt, az oxidáz teszt, az indol teszt, a metilvörös teszt, a Voges-Proskauer teszt, a citráthasznosítási teszt és a szénhidrát-fermentációs minták alapján a Bergeys kézikönyvben (Hensyl, 1994) leírtak szerint próbaképpen laktobacilliként azonosítottuk.

DNS extrakció az izolátumokból: A DNS-t 4 joghurtból izolált mintából vontuk ki a klasszikus hő-olvasztásos módszerrel (Salehi et al., 2005). Az MRS agar palástról származó tiszta baktériumtenyészetet MRS táptalajon szubkultúráztuk, amelyből 1,5 mL táptalajt vettünk eppendorf csőbe, és 5 percig 10 000 rpm-en centrifugáltuk. Ezt követően a felülúszót elvetettük, és a pelletet összegyűjtöttük. Körülbelül 200 μL autoklávozott deionizált vizet adtunk a pellethez, és ujjrázással feloldottuk. Az eppendorf-cső kupakját steril tűvel átszúrtuk, majd a csövet 100 °C-os vízfürdőben 10 percig forraltuk. Közvetlenül a forralás után az eppendorf-csövet 10 percig jégen tartottuk, majd 10 000 rpm-en 10 percig centrifugáltuk. Ezután 100-150 μL bakteriális kromoszómális DNS-t tartalmazó felülúszót gyűjtöttünk.

Génspecifikus PCR-amplifikáció: Mind a 4 izolátum nemzetségszintű hovatartozásának meghatározásához PCR-t végeztünk a Dubernet és munkatársai (2002) által tervezett Lactobacillus nemzetségspecifikus primer készlettel LbLMA1-rev (5′-CTCAA AACTAAACAAAGTTTC-3′) és R16-1 (5′-CTTGTACACACACCG CCCGTCA-3′). A PCR analízist a 16-23S riboszómális RNS intergénikus spacer régió alapján végeztük a korábban leírtak szerint (Dubernet et al., 2002).

A reakcióelegy (20 μL) tartalmazott 1 μL (100 ng μL1) minden primerből 10 μL 10× PCR Master Mix, 6 μL PCR-víz és 2 μL templát hozzáadásával. A futtatás feltételei a kezdeti denaturálás 95°C-on 5 percig, majd 30 ciklus, amely a következőkből állt: denaturálás 95°C-on 30 másodpercig, lágyítás 55°C-on 30 másodpercig, hosszabbítás 72°C-on 30 másodpercig és egy 7 perces végső hosszabbítási lépés 72°C-on. A termékeket elemzésig 4°C-on tároltuk. Az amplifikált termékeket 1%-os agaróz gélben, TAE pufferben (40 mM Tris-acetát, 1 mM EDTA, pH 8,2) elektroforézisnek vetettük alá. A géleket etídium-bromiddal (5 μg ml1) festettük és UV-transzilluminátor (Biometra GmBH, Németország) alatt vizualizáltuk.

A probiotikus tulajdonságok elemzése: A probiotikus tulajdonságokat a következő tesztek elemzésével határoztuk meg.

NaCl-tolerancia teszt: A NaCl-tolerancia meghatározásához izolált Lactobacillusokat növesztettünk MRS-lében, amely kilenc kémcsövet tartalmazott, amelyeket különböző NaCl-koncentrációkkal (1-9%) állítottunk be. Miután 15 percig 15 Ibs nyomáson 121°C-on autoklávoztuk, minden egyes kémcsőbe 10 μL Lactobacillus éjszakai tenyészetet oltottunk, majd anaerob módon 37°C-on 24 órán át inkubáltuk. 24 órás inkubáció után a baktériumok növekedését spektrofotométerrel mértük 560 nm-en (Graciela és Maruia, 2001).

Epe-só tolerancia teszt: A baktériumtenyészetek növekedési sebességét különböző mennyiségű (0,05, 0,1, 0,15, 0,3 és 0,5%) epesót tartalmazó MRS-lében határoztuk meg. A frissen készített kultúrákat beoltottuk (1%) a táptalajba, és 37°C-on 24 órán át inkubáltuk anaerob körülmények között. Ezután az egyes minták optikai sűrűségét spektrofotométerrel mértük 560 nm-en (Graciela és Maruia, 2001).

A növekedés optimális pH-értékének meghatározása: A növekedés optimális pH-értékének meghatározásához 100 μL friss Lactobacillus overnight-kultúrát oltottunk be MRS-létrát tartalmazó kémcsövekbe, amelyek pH-értéke 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5 és 8,0 között változott. A pH növekedésre gyakorolt hatásának meghatározásához acetát puffert (pH -4, 4,5, 5, 5,5, 5,5, 6, 6,5), Tris-HCl puffert (pH-7) és borát puffert (pH-8) használtunk. A beoltott táptalajt 24 órán át 37 °C-on, anaerob körülmények között inkubáltuk. Az inkubációt követően a baktériumok növekedését spektrofotométerrel mértük 560 nm-en a beoltatlan kontrollleveshez képest.

A szerves sav mennyiségi meghatározása és a pH-érték meghatározása: Az izolátumok által termelt szerves savak mennyiségi meghatározását és pH-értékük meghatározását Hoque et al. (2010) szerint végeztük el. A 10%-os sovány tejjel kiegészített MRS levest beoltottuk az izolátumok 1%-os (v/v) vagy 100 μL éjszakai kultúrájával, és anaerob körülmények között 37°C-on inkubáltuk 72 órán keresztül. 24, 48 és 72 óránként erjesztett mintákat gyűjtöttünk, és a megalvadt tej folyadékát szűréssel elválasztottuk. Szűrés után az elválasztott folyadék pH-ját digitális elektródos pH-mérővel rögzítettük, és a szerves sav mennyiségi meghatározását 0,1 N NaOH-val történő titrálással végeztük, fenoftalint használva pH-indikátorként (Hoque et al., 2010).

A patogén baktériumokkal való interferencia szűrése: Az izolált Lactobacillus spp. antibakteriális aktivitását néhány patogén baktériummal szemben módosított agar overlay módszerrel határoztuk meg (Aween et al., 2012). Nyolc különböző humán patogén, Shigella dysenteriae, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus megaterium, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae, Escherichia coli és Shigella sonnei került felhasználásra ebben a vizsgálatban tesztpatogénként. Az antibakteriális aktivitást a bakteriosztatikus vagy baktericid hatás meghatározásával jellemezték tovább. A vizsgálatot a növekedésgátlási zóna letapogatásával végezték. A tampont tápanyag-agar lemezre csíkoztuk, és aerob módon 37°C-on inkubáltuk 72 órán keresztül. A növekedés jelenlétét a tápanyag-agar lemezen gátló aktivitásként, azaz bakteriosztatikusnak, míg a növekedés hiányát baktericidnek értelmeztük.

Eredmények és megvitatás

A baktériumok azonosítása bakteriológiai és biokémiai vizsgálatokkal: A négy izolátumot 6,5 pH-jú Man, Rogosa és Sharpe (MRS) táptalajon tenyésztettük. Az összes izolátum kisméretű, szabálytalan és kerek alakú, fényes, fehéres krémszínű vagy barnás színű, morfológiailag a Lactobacillus spp.

Az összes izolátumot fényes térmikroszkóp alatt vizsgáltuk, hogy megfigyeljük mikroszkópos jellemzőiket. Ezek az izolátumok gram-pozitív, rövid és közepes pálcika alakú, nem spóraképző baktériumnak bizonyultak (1a-d ábra), ami arra utal, hogy a Lactobacillus spp. tagjai (Thamaraj és Shah, 2003).

Ezeken kívül néhány biokémiai tesztet, mint például kataláz teszt, oxidáz teszt, indol teszt, metilvörös (MR) teszt, Voges Proskauer (VP) teszt, citrát hasznosítási teszt és szénhidrát fermentációs mintázatot végeztünk a Bergeys kézikönyv szisztematikus bakteriológiája (Hensyl, 1994) által leírtak szerint.

Az izolátumok kataláz és oxidáz negatívnak bizonyultak, és az IMViC (indol, metil-vörös, Voges Proskauar, citrát hasznosítás) tesztekben is minden izolátum negatívnak bizonyult, ezáltal ezek megerősíthetik, hogy az izolátumok Lactobacillus spp. voltak (Dhanasekaran et al.,

Ebben a vizsgálatban mind a négy izolátum képes volt 11 különböző szénhidrát, azaz glükóz, szacharóz, fruktóz, laktóz, xilóz, ribóz, galaktóz, maltóz, mannit, ramnóz és dextróz fermentálására, ami azt jelzi, hogy képesek különböző élőhelyeken növekedni, különböző típusú szénhidrátokat felhasználva. Az összes bakteriológiai és biokémiai vizsgálat összesített eredményeit az 1. táblázat tartalmazza. Mindezeket az eredményeket a Chowdhury és munkatársai (2012) megállapításainak megfelelőnek találtuk.

Molekuláris azonosítás nemzetségspecifikus PCR segítségével: Ebben a vizsgálatban a Lactobacillus 16 és 23S riboszomális RNS gének közötti spacer régió nukleotidszekvenciái közötti hasonlóságok elemzése alapján készített nemzetségspecifikus primert használtunk (Dubernet és munkatársai, 2002). Ennek a nemzetségspecifikus primernek a specifikusságát egy univerzális primerrel kombinálva 23 különböző eredetű Lactobacillus törzzsel szemben teszteltük. A PCR-termékeket 1%-os agarózban gélelektroforézisen futtattuk át, és UV-transzilluminátorral vizualizáltuk. Minden mintánál (M1, M2, M3 és S2) egy 200 bp-os amplikon várhatóan éles sávot találtunk, amely megfelel a Lactobacillus spp. 16-23S rRNS intergenikus spacer régiójának (Dubernet et al., 2002). Így mind a 4 izolátumot nemzetség szinten Lactobacillus spp-ként igazoltuk. A negatív kontroll sablon nélkül nem adott sávot, ami arra utal, hogy mind a 4 PCR termék a sablon DNS-nek megfelelt (2. ábra).

A probiotikus tulajdonságok elemzése: A probiotikus baktériumok számos antibakteriális tulajdonsággal rendelkező anyagot termelnek, többek között szerves savakat, H2O2-t, bakteriocint, amelyek befolyásolják a baktériumok anyagcseréjét vagy toxintermelést (Rafter, 2003; Rolfe, 2000; Vandenbergh, 1993).

Ezért a bélben lévő kedvezőtlen körülményekkel, mint a NaCl és az epesó, képesnek kell lenniük megbirkózni.

NaCl-tolerancia teszt: A joghurtokból származó Lactobacillus spp. izolátum képes volt tolerálni 1-9% NaCl-t. Az izolátumok NaCl-toleranciájának meghatározásához optikai sűrűséget mértünk 560 nm-en, és az adatokat ábrázoltuk. Az M1, M2, M3 és S2 izolátum jól növekedett 1%-os NaCl-koncentrációban. Az M1, M2, M3 és S2 izolátumok maximális növekedése (OD) 1,420, 2,143, 1,662 és 2,207 volt 1%-os NaCl koncentrációban (3. ábra). A magas sótűrés kívánatos tulajdonság a probiotikumként felhasználandó szervezetek számára.

Tudott, hogy a NaCl egy gátló anyag, amely gátolhatja bizonyos baktériumtípusok növekedését. Ebben a vizsgálatban az eredmények azt mutatták, hogy a joghurtokból izolált Lactobacillus spp. képes volt tolerálni az 1-9% NaCl-t, és az optimális növekedést 1-5% NaCl mellett figyelték meg (Hoque et al., 2010).

Epe sótolerancia teszt: Az izolált Lactobacillus spp. képes volt túlélni 0,05, 0,1, 0,15 és 0,3%-os epesavban. Az izolált Lactobacillus spp. a fenti epesavkoncentrációkban is képes volt szaporodni. Az optikai sűrűséget 560 nm-en mértük, és az adatokat ábrázoltuk. Minden izolátum jól szaporodik 0,05%-os epesavkoncentrációban. Az M1, M2, M3 és S2 izolátumok maximális növekedése (OD) 1,741, 2,213, 1,758 és 2,125 volt. A növekedési sebesség az epesókoncentráció növekedésével csökkent (4. ábra).

A kísérletben 0,05-0,3%-os epekoncentrációt használtunk, amely az emberi bélrendszerben is megtalálható, és az egészséges emberben az epe maximális koncentrációja 0,3% (Graciela és Maruia, 2001). Arról számoltak be, hogy mielőtt egy probiotikus baktériumot kiválasztanánk emberi fogyasztásra, annak elviselhetőnek kell lennie a 0,3%-os epekoncentrációval szemben (Gilliland és mtsai., 1984). Az eredmény alapján feltételezhető, hogy ezek a törzsek potenciálisan felhasználhatók probiotikus szervezetként, mivel az összes izolátum rezisztens volt és képes volt 0,3%-os epesókoncentrációban növekedni.

A növekedés optimális pH-értékének meghatározása: A joghurtokból izolált Lactobacillus spp. képes volt 4,0-8,0 közötti pH-tartományban növekedni. Az optikai sűrűséget 560 nm-en mértük, és az adatokat ábrázoltuk. Az M1, M3 és S2 izolátumok maximális növekedése (OD) 2,201, 2,0619 és 2,237 volt pH 6,0-nál, míg az M2 izolátum maximális növekedése 2,259 volt pH 6,5-nél (5. ábra). Az izolátumok 4,0 és 8,0 közötti pH-n is képesek voltak növekedni, de az optimális növekedés 5,0 és 6,5 közötti pH-nál volt megfigyelhető, amikor 37 °C-on MRS-lében tenyésztették őket. Ebből a vizsgálatból arra lehet következtetni, hogy a Lactobacillus spp. növekedési üteme bizonyos szakaszban csökken, amikor a pH-koncentráció nő (Chowdhury et al., 2012).

A szerves sav mennyiségi meghatározása és a pH érték meghatározása: A szerves sav mennyiségi meghatározásához titrálási módszert alkalmaztunk.

A szerves sav mennyiségi meghatározása = V×N×D

melyben V a NaOH térfogata, N a NaOH erőssége és D a hígítási tényező. A szerves savtermelés eredményét a 2. táblázat mutatja be.

Ez a vizsgálat azt mutatja, hogy a szerves savtermelés az inkubációs idővel nőtt, ugyanakkor a közeg pH-ja csökkent a savtermelés növekedésével. Az eredményből (2. táblázat) a Bogra joghurtból izolált probiotikus Lactobacillus esetében a legmagasabb savtartalom (1,9%) és a legalacsonyabb pH 3,64 volt megfigyelhető 72 órás 37°C-on történő inkubáció után. A Chittagong különböző szupermarketeiből származó joghurtokból izolált többi probiotikus baktérium a legmagasabb savasságot (1,83, 2,11 és 2,11%) és a legalacsonyabb pH-t (3,9, 3,68 és 3,65) mutatta 72 órás inkubáció után.

A laktobacillusok szerves savtermelésében kisebb eltérés mutatkozik a regionális különbségek miatt, ami arra utal, hogy ezek az izolátumok kissé éghajlat- és környezetfüggők (Hoque et al., 2010).

A patogén baktériumokkal való interferencia szűrése: A probiotikumok, köztük a Lactobacillus, a Bifidobacterium és a Streptococcus spp. ismertek arról, hogy gátolják a bélrendszeri kórokozók széles körének növekedését az emberben. A bél mikroflóra egyensúlyának felborulása által okozott betegségekkel szembeni kedvező hatások mellett a baktériumoknak a vastagbéldaganatok kialakulása elleni számos kísérletes megfigyeléséről számol be Dunne és munkatársai (2001) és Wollowski és munkatársai (2001).

Ebben a tanulmányban a kiválasztott 4 izolátumot különböző patogén baktériumokkal, így a Shigella dysenteriae, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus megaterium, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae, Escherichia coli és Shigella sonnei élelmiszer eredetű betegségekkel kapcsolatos antibakteriális aktivitásuk alapján vizsgálták. A gátlásuk összehasonlítása (mm-ben) 8 teszt kórokozóval szemben a 3. táblázatban látható.

A kísérleti eredmények azt mutatták, hogy az M1 izolátum legnagyobb gátló aktivitása a Bacillus cereus ellen (51,20±1,22 mm) és a legkisebb gátlási zóna (23,46±1,00 mm) a Shigella sonnei ellen volt 72 órás inkubációt követően. Az M2 izolátum gátlási zónájának legnagyobb átmérője E. coli ellen (38,43±1,00 mm) és a legalacsonyabb zóna (20,10±1,00 mm) Bacillus megaterium ellen mutatkozott 72 órás inkubáció után. Hasonlóképpen, az M3 izolátum gátlási zónájának legnagyobb átmérője a P. aeruginosa ellen (42,90±1,20 mm) és a legkisebb zóna (17,83±1,10 mm) a S. aureus ellen mutatkozott. Végül az S2 izolátumban a legnagyobb zóna az E. coli ellen (43,80±1,20 mm) és a legkisebb zóna (21,63±1,10 mm) a S. aureus ellen volt megfigyelhető 72 órás inkubációt követően. A Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus megaterium, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae és Escherichia coli elleni eredmények a Chowdhury és munkatársai (2012) eredményeihez igazodtak.

A jelen vizsgálatban az M1, M2, M3 és S2 izolátumok kielégítő eredményeket mutattak a bakteriocid és bakteriosztatikus aktivitás tekintetében. Az M1 izolátum baktericid volt a Bacillus megaterium, Vibrio cholera, Shigella sonnei és bakteriosztatikus a Shigella dysenteriae, Bacillus cereus, P. aeruginosa, S. aureus és E. coli ellen. Az M2 izolátum baktericid volt a Bacillus cereus, Shigella sonnei és bakteriosztatikus a Shigella dysenteriae, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus megaterium, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae, Escherichia coli ellen. Az M3 izolátum baktericid volt a Shigella dysenteriae, Bacillus megaterium és Staphylococcus aureus ellen, és bakteriosztatikus a Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Vibrio cholerae ellen, Escherichia coli és Shigella sonnei, az S2 izolátum pedig baktericid volt a Shigella dysenteriae, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae és Shigella sonnei ellen, és bakteriosztatikus a Bacillus megaterium és az Escherichia coli ellen.

Összefoglalás

Ebben a vizsgálatban a Lactobacillus spp, izolálták és azonosították szelektív regionális joghurtokból. A baktériumok azonosításához számos bakteriológiai és biokémiai vizsgálatot végeztek. Emellett a bakteriológiai azonosítás megerősítésére PCR-t végeztünk a Lactobacillus spp. 16-23S rRNS intergenikus spacer régiójának megfelelő genus-specifikus (LbLMA-rev) és univerzális (R16-1 primer) primerekkel. Az izolált Lactobacillus spp. képes volt tolerálni az olyan gátló anyagokat, mint a NaCl (1-9%) és az epesó (0,05-0,3%), és lúgos körülmények között (pH 8,0) is képes volt túlélni. Mindegyik izolátum (M1, M2, M3 és S2) képes volt olyan szénhidrátok hasznosítására, mint a glükóz, xilóz, szacharóz, fruktóz, galaktóz, laktóz, maltóz, ribóz, ramnóz, mannit és dextróz. Továbbá az izolált Lactobacillus spp. mind a 4 izolátumból (M1, M2, M3 és S2) képes volt szerves savat termelni a tejben. Ez a vizsgálat azt jelzi, hogy a Lactobacillusok szerves savtermelésében kisebb eltérések vannak a regionális eltérések miatt. Mind a 4 izolátum (M1, M2, M3 és S2) antibakteriális aktivitása nyolc gyakori humán patogén baktériummal szemben kielégítőnek bizonyult, és az izolátumok extracellulárisan termelnek bakteriocinokat. Egy probiotikumnak képesnek kell lennie a patogén organizmusok gátlására, és el kell tudnia viselni az emberi bélrendszer olyan zord körülményeit, mint a magas só, az alacsony pH és a magas epesókoncentráció. Az izolált Lactobacillus spp. mindegyike megfelelt ezeknek a kritériumoknak, ezért potenciális probiotikumnak tekinthetők az emberi egészség szempontjából.