Falldarstellung

Eine 43-jährige Frau mit schwerer Anämie nach Splenektomie, die zuvor als Blutgruppe A, Rh (D) negativ typisiert worden war, wurde im Dezember 2013 zur ABO/Rh(D)-Typisierung und zum Antikörperscreening an das immunhämatologische Referenzlabor (IRL) der iranischen Bluttransfusionsorganisation (IBTO) in Teheran, Iran, überwiesen, mit der Bitte um zwei Einheiten Erythrozyten zur Transfusion. Die Anamnese der Patientin ergab wiederholte Aborte und Fehlgeburten ohne Bluttransfusionen in der Vergangenheit. Ihre Familienanamnese ergab, dass ihre Eltern eine blutsverwandte Ehe führten und sie vier Geschwister hatte, die alle noch lebten und bei denen kein Verdacht auf eine Blutkrankheit bestand, mit Ausnahme eines Bruders, bei dem eine Splenektomie wegen einer hereditären Sphärozytose-Anämie durchgeführt wurde. Ihr einziges früheres Kind war ein gesunder fünfzehnjähriger Junge, der typisiert wurde und bei dem der Rhnull-Phänotyp nicht bestätigt wurde. Die Gerinnungs- und Hämatologieparameter lagen im Normalbereich, mit Ausnahme eines sehr niedrigen Hämoglobins von 3,2 g/dL.

Es wurde festgestellt, dass das Serumplasma des Patienten in den Zellen des Antikörper-Panels stark reagierte und 4 + makroskopisch in der 37℃-Phase und in der Anti-Humanglobulin-Phase ergab. Das Ergebnis des Autokontrolltests war negativ. Der direkte Antiglobulintest (DAT) war positiv (1+) mit differenziertem Anti-IgG negativ und Anti-C3d positiv (1+).

Diese Ergebnisse deuteten auf das Vorhandensein von klinisch bedeutsamen Alloantikörpern gegen mehrere negative Antigene oder ein Antigen mit hoher Prävalenz hin. Ein Antikörper-Screeningtest beim Bruder des Patienten war negativ. Für das Antikörperscreening wurde ein selbst hergestelltes, verfügbares Drei-Zellen-Antigen-Panel (IBTO-Mini-Panel) verwendet, bei dem das Plasma des Patienten unter Verwendung der Low Ionic Strength Saline (LISS) zu Erythrozyten ohne Papain-Enzym hinzugefügt wurde. Das IBTO-Mini-3-Zellen-Panel und das 11-Zellen-Kit zur Antikörperidentifizierung sowie die ausgewählten Zellen wurden innerhalb des Zweijahreszeitraums mit kommerziellen CE-gekennzeichneten Diamed-Kits validiert. Der Antikörpersuchtest wurde zweimal parallel mit den von IBTO hergestellten Kits und den Diamed-Kits durchgeführt. Die Ergebnisse wurden verglichen, und im Falle positiver Ergebnisse wurde das 11-Zellen-Antikörper-ID-Panel der Firma Diamed gleichzeitig mit dem IBTO 11-Zellen-Antikörper-ID-Panel verwendet. Das hausgemachte IBTO-Antikörper-Identifizierungspanel und ausgewählte Zellen wurden zum Ausschluss und zur Einbeziehung von Alloantikörpern verwendet.

Für den Antikörpersuchtest wurde die Säulenagglutinationsmethode mit Antiglobulingelkarten (INVITROGEL AHG coombs-Germany) verwendet. Die Gelkarten wurden 15 Minuten lang bei 37 °C inkubiert und anschließend 10 Minuten lang zentrifugiert. Für die Antikörperidentifizierung und ausgewählte Zelltests wurden Standardröhrchenmethoden (Bio-Rad AHG- Deutschland) verwendet.

Klinisch bedeutsame Alloantikörper wurden als diejenigen Antikörper definiert, die auf der Grundlage der Reaktivität bei 37 °C und/oder der Anti-Humanglobulin-Phase (AHG) potenziell eine Zerstörung der Erythrozyten verursachen könnten.

Die Patientin und ihr Bruder zeigten bei der erweiterten Phänotypisierung, dass sie negativ für D, C, E, c, e Erythrozyten-Antigene waren, was darauf hindeutete, dass sie stark verdächtig waren, dem seltenen Rhnull-Phänotyp anzugehören.

Adsorptions- und Elutionsstudien mit Anti-Humanglobulin (AHG, CE- Immunodiagnostika, Am Seerain 13 Germany, Eschelbronn) zeigten nicht das Vorhandensein von D, C, E, c, e, Erythrozyten-Antigenen im Blut beider Patienten. Wir führten eine Rh-Phänotypisierung mit zwei Antiseren durch (Diagast 251/AV.AVINEE- 59120 Loos, Frankreich und CE-Immundiagnostika, Am Seerain 13 Deutschland, Eschelbronn). Positive und negative Kontrolltests wurden für jedes Antigen gemäß den Empfehlungen des Herstellers durchgeführt. Auf der Grundlage dieser kollektiven Befunde interpretierten wir diese Ergebnisse als stark suggestiv für den Rhnull-Phänotyp mit einem klinisch signifikanten Anti-Rh29 im Serum der Patientin, deren Daten in Tabelle 1 dargestellt sind.

Kompatibilitätstests ergaben, dass das Serum der Patientin nicht mit ihrem Bruder reagierte. Innerhalb von 10 Tagen wurden zwei Einheiten Erythrozyten von ihrem Bruder entnommen. Die Patientin wurde mit den Erythrozyteneinheiten transfundiert und benötigte seitdem keine Transfusion mehr. Ihr Bruder spendete in den Jahren 2014 und 2015 zwei weitere Einheiten Erythrozyten. Auch die Kryokonservierung wurde für die zukünftige Verwendung genutzt.