Tapauksen esittely

43-vuotias nainen, jolla oli vakava anemia pernanpoiston jälkeen ja jonka veriryhmäksi oli aiemmin määritetty A, Rh (D) negatiivinen, ohjattiin Iranin verensiirto-organisaation (IBTO) immunohematologiseen vertailulaboratorioon (IRL), Teheran, Iran, ABO/Rh(D)-ryhmätyypitystä ja vasta-aineiden seulontatestiä varten, ja häneltä pyydettiin kahta yksikköä RBC:tä verensiirtoa varten joulukuussa 2013. Potilaan sairaushistoriasta ilmeni toistuvia abortteja ja keskenmenoja, eikä hänellä ollut aiemmin ollut verensiirtoja. Perhehistoriasta kävi ilmi, että hänen vanhemmillaan oli avioliitto, ja hänellä oli neljä sisarusta, jotka kaikki olivat elossa ilman epäiltyä verisairautta lukuun ottamatta yhtä veljeä, jolle tehtiin splenektomia perinnöllisen sferosytoosianemian vuoksi. Hänen ainoa edellinen lapsensa oli terve viisitoistavuotias poika, joka tyypitettiin, mutta jonka Rhnull-fenotyyppiä ei vahvistettu. Koagulaatio- ja hematologiset parametrit olivat normaalialueella lukuun ottamatta erittäin alhaista hemoglobiinia, 3,2 g/dl.

Havaittiin, että potilaan seerumiplasma reagoi voimakkaasti vasta-ainepaneelin soluissa antaen 4 + makroskooppisen 37℃-vaiheessa ja anti-human globuliinivaiheessa. Autokontrollitestin tulos oli negatiivinen. Suora antiglobuliinitesti (DAT) oli positiivinen (1+) ja erotusdiagnostiikka anti-IgG negatiivinen ja anti-C3d positiivinen (1+).

Nämä tulokset viittasivat kliinisesti merkittävien allovasta-aineiden esiintymiseen useita negatiivisia antigeenejä vastaan tai suuren esiintyvyyden antigeeniä vastaan. Vasta-aineiden seulontatestin tulos oli negatiivinen potilaan veljelle. Vasta-aineiden seulontamenetelmässä käytettiin kotitekoista saatavilla olevaa kolmen solun antigeenipaneelia (IBTO minipaneeli), jossa potilaan plasmaa lisättiin RBC:hen ilman papaiinientsyymiä käyttäen Low Ionic Strength Saline (LISS) -menetelmää. IBTO mini-3-solupaneeli ja vasta-ainetunnistus 11-solupakkaus sekä valitut solut validoitiin kahden vuoden aikana käyttäen kaupallisia CE-merkittyjä Diamed-pakkauksia. Vasta-aineiden seulontatesti tehtiin kahdesti rinnakkain käyttäen IBTO:n valmistamia sarjoja ja Diamedin sarjoja. Tuloksia verrattiin keskenään, ja jos tulokset olivat positiivisia, Diamed-yhtiön 11 solun vasta-ainetunnistuspaneelia käytettiin samanaikaisesti IBTO:n 11 solun vasta-ainetunnistuspaneelin kanssa. IBTO:n itse valmistamaa vasta-aineiden ID-paneelia ja valittuja soluja käytettiin allovasta-aineiden poissulkemiseen ja sisällyttämiseen.

Vasta-aineiden seulontatestissä käytettiin sarakeagglutinaatiomenetelmää, jossa käytettiin antiglobuliinigeelikorttia (INVITROGEL AHG coombs-Germany). Geelikortteja inkuboitiin 37 °C:ssa 15 minuuttia, minkä jälkeen niitä sentrifugoitiin 10 minuuttia. Vasta-aineiden tunnistamiseen ja valikoiduille soluille tehtäviin testeihin käytettiin tavanomaisia putkimenetelmiä (Bio-Rad AHG- Saksa).

Kliinisesti merkittäviksi allovasta-aineiksi määriteltiin ne vasta-aineet, jotka voivat mahdollisesti aiheuttaa RBC-tuhoa 37 °C:n reaktiivisuuden ja/tai anti-human globuliini (AHG) -vaiheen perusteella.

Potilaan ja hänen veljensä laajennettu fenotyypitys osoitti, että he olivat negatiivisia D-, C-, E-, c-, e-RBC-antigeenien suhteen, mikä osoitti, että heitä epäiltiin vahvasti harvinaiseen Rhnull-fenotyyppiin kuuluviksi.

Adsorptio- ja eluointitutkimukset anti-humaaniglobuliinissa (AHG:ssä (AHG:ssä, CE-immunodiodiagnostiikka, Am Seerain 13, Saksa, Eschelbronn) eivät paljastaneet molemmilta potilailta saatujen verinäytteiden perusteella, ettei molemmilta potilailta saatujen verinäytteiden perusteella ollut havaittavissa d-, c-, e- ja E-ryhmässä D-, E-ryhmässä C-, E-ryhmän RBC:n vasta-ainet. Teimme Rh-fenotyypin määrityksen kahdella antiseerumilähteellä (Diagast 251/AV.AVINEE- 59120 Loos, Ranska ja CE- Immunodiagnostika, Am Seerain 13 Saksa, Eschelbronn). Positiiviset ja negatiiviset kontrollitestit tehtiin kullekin antigeenille valmistajan suositusten mukaisesti. Näiden yhteisten löydösten perusteella tulkitsimme tulosten viittaavan vahvasti Rhnull-fenotyyppiin, ja kliinisesti merkittävä anti-Rh29 todettiin naispotilaan seerumissa, jonka tiedot on esitetty taulukossa 1.

Yhteensopivuustutkimus osoitti, että naispuoliselta potilailta peräisin oleva seerumi ei reagoinut hänen veljensä kanssa. Veljeltä kerättiin kaksi yksikköä RBC:tä 10 päivän aikana. Hänelle tehtiin verensiirto näillä RBC-yksiköillä, eikä hän ole tarvinnut verensiirtoa sen jälkeen. Hänen veljensä luovutti kaksi muuta RBC-yksikköä vuosina 2014 ja 2015. Myös kryosäilytystä hyödynnettiin tulevaa käyttöä varten.