Prezentacja przypadku

A-43-letnia kobieta z ciężką niedokrwistością po splenektomii, wcześniej oznaczona jako grupa krwi A, Rh (D) ujemna, została skierowana do Immunohematology Reference Laboratory (IRL) of the Iranian Blood Transfusion Organization (IBTO), Teheran, Iran na typowanie ABO / Rh(D) i badanie przesiewowe przeciwciał z prośbą o dwie jednostki RBC do transfuzji w grudniu 2013 roku. Historia medyczna pacjentki ujawniła nawracające aborcje i poronienia, bez historii transfuzji krwi. W wywiadzie rodzinnym stwierdzono, że jej rodzice byli spokrewnieni, a ona sama miała czworo rodzeństwa, wszyscy żyli bez podejrzenia choroby krwi, z wyjątkiem jednego z braci, który przeszedł splenektomię z powodu dziedzicznej niedokrwistości sferocytozowej. Jedynym jej poprzednim dzieckiem był zdrowy piętnastoletni chłopiec, u którego nie potwierdzono fenotypu Rhnull. Parametry koagulacyjne i hematologiczne były w normie, z wyjątkiem bardzo niskiej hemoglobiny 3,2 g/dl.

Zauważono, że osocze surowicy pacjenta silnie reagowało w komórkach panelu przeciwciał, dając 4 + makroskopowe w fazie 37℃ i w fazie antyludzkiej globuliny. Wynik testu auto-kontrolnego był ujemny. Bezpośredni test antyglobulinowy (DAT) był pozytywny (1+) z różnicowym anty IgG negatywnym i anty-C3d pozytywnym (1+).

Wyniki te sugerowały obecność klinicznie istotnych alloprzeciwciał przeciwko wielu negatywnym antygenom lub antygenowi o wysokiej częstości występowania. U brata pacjenta wynik testu przesiewowego na obecność przeciwciał był ujemny. Do badania przesiewowego przeciwciał zastosowano dostępny w warunkach domowych trzykomórkowy panel antygenowy (IBTO mini-panel), w którym osocze pacjenta zostało dodane do krwinek czerwonych bez enzymu papainy przy użyciu soli fizjologicznej o niskiej sile jonowej (LISS). Panel IBTO mini-3cell i zestaw do identyfikacji przeciwciał 11cell, a także wybrane komórki zostały zwalidowane w ciągu dwóch lat przy użyciu komercyjnych zestawów Diamed ze znakiem CE. Badanie przesiewowe przeciwciał wykonano dwukrotnie równolegle przy użyciu zestawów IBTO i Diamed. Wyniki porównywano i w przypadku wyników pozytywnych stosowano jednocześnie z panelem IBTO 11cells antibody ID firmy Diamed. Panel IBTO homemade antibody ID oraz wyselekcjonowane komórki służyły do wykluczenia i włączenia alloprzeciwciał.

Do badania przesiewowego przeciwciał zastosowano metodę aglutynacji kolumnowej z antyglobulinową kartą żelową (INVITROGEL AHG coombs-Niemcy). Karty żelowe były inkubowane w temperaturze 37 °C przez 15 minut, a następnie odwirowywane przez 10 minut. Standardowe metody probówkowe (Bio-Rad AHG- Niemcy) były używane do identyfikacji przeciwciał i testów na wybrane komórki.

Clinically significant alloantibodies were defined as those antibodies that potentially could cause RBC destruction based on the reactivity at 37 °C and/or anti-human globulin (AHG) phase.

Pacjentka i jej brat rozszerzone fenotypowanie wykazało, że byli oni negatywni dla antygenów D, C, E, c, e RBC, wskazując, że byli silnie podejrzani o bycie rzadkim fenotypem Rhnull.

Adsorpcja i badania elucji w antyludzkiej globulinie (AHG, CE- Immunodiagnostika, Am Seerain 13 Niemcy, Eschelbronn) nie ujawniły obecności antygenów D, C, E, c, e, RBC we krwi uzyskanej od obu pacjentów. Wykonano oznaczenie fenotypu Rh przy użyciu surowic z dwóch źródeł (Diagast 251/AV.AVINEE- 59120 Loos, Francja i CE- Immunodiagnostika, Am Seerain 13 Germany, Eschelbronn). Dodatnie i ujemne testy kontrolne były wykonywane dla każdego antygenu zgodnie z zaleceniami producenta. Na podstawie tych zbiorczych ustaleń zinterpretowaliśmy te wyniki jako silnie sugerujące fenotyp Rhnull z klinicznie istotnym anty-Rh29 zidentyfikowanym w surowicy pacjentki, której dane przedstawiono w Tabeli 1.

Testy zgodności wykazały, że surowica od pacjentki nie reagowała z jej bratem. W ciągu 10 dni pobrano dwie jednostki RBC od brata. Pacjentce przetoczono te jednostki RBC i od tego czasu nie potrzebowała już żadnej transfuzji. Jej brat oddał kolejne dwie jednostki RBC w 2014 i 2015 roku. Zastosowano również kriokonserwację do wykorzystania w przyszłości.