MÓDSZEREK
A Wisconsin állambeli Marshfield Clinicben prospektív módon toboroztak 1-79 éves betegeket, akik az influenzaszezonban akut légúti megbetegedés miatt fordultak orvoshoz. A betegek akkor voltak jogosultak influenzavizsgálatra, ha <120 óra (5 nap) időtartamú lázas, hidegrázásról vagy köhögésről számoltak be. A részvétel előtt a betegeket egy, a vizsgálathoz nem kapcsolódó egészségügyi szolgáltató értékelte. Etikai okokból a vizsgálatban való részvételt azokra a betegekre korlátozták, akiket megvizsgáltak, és akiknek nem írtak fel vírusellenes terápiát.
A tájékoztatáson alapuló írásbeli beleegyezés megadását követően egy kutatási koordinátor orr- vagy orrgaratmintát vett az influenza gyors antigénteszt (2007-2008-ban) és/vagy valós idejű reverz transzkripciós polimeráz láncreakció (RT-PCR) (minden évszakban) általi vizsgálatához. A fordított transzkripciós PCR-t helyben végezték a Centers for Disease Control and Prevention primereinek és szondáinak felhasználásával. A gyorsteszt és az RT-PCR eredményei általában 4, illetve 24 órán belül rendelkezésre álltak. A pozitív gyorsteszteket RT-PCR-rel erősítették meg. A betegeket randomizálták, hogy 2:1 arányban oseltamivirt vagy placebót kapjanak, és a kezelést a kezdeti pozitív eredmény után a lehető leghamarabb megkezdték.
A >88 kilós betegek naponta kétszer 75 mg oseltamivir vagy azonos placebo kapszulát kaptak 5 napon keresztül (10 adag). A ≤88 font súlyú gyermekek az oseltamivir folyékony formáját kapták 15 mg/ml koncentrációban vagy placebót a testsúlynak megfelelő standard adagban. Külön randomizálási táblázatokat használtak a kapszulás és a szuszpenziós formulákhoz, és 6-os blokkokban véletlenszerűen sorszámmal osztották ki a hatóanyagot vagy a placebót. A vizsgálati gyógyszereket előre elkészítették a randomizálási táblázatnak megfelelően, és előzetesen felcímkézték a sorszámos randomizálási számmal. A megfelelőséget úgy ellenőrizték, hogy megkérték a résztvevőket, hogy az alább ismertetett tüneti jelentések kitöltésekor minden egyes bevett adagot jelezzenek.
A vizsgálat megkezdése előtt közvetlenül (0. nap) és a 3. vagy 4. napon a vizsgálat megkezdése után további tamponmintákat vettek. Kevés résztvevő volt tenyésztéspozitív; ezért RT-PCR kimutatással közelítettük meg a vírusürítést, elismerve, hogy a vírusnukleinsav fertőző vírus hiányában is kimutatható lehet.
Minden randomizált résztvevő (vagy gondviselő) minden reggel és este tüneti felmérést töltött ki telefonon vagy biztonságosan online. A jelentéstétel a vizsgálati gyógyszer megkezdése után legalább 7 napig vagy a tünetek megszűnéséig (legfeljebb 14 napig) folytatódott. A résztvevők digitális szájhőmérőt kaptak, és arra utasították őket, hogy reggel és este mérjék és jegyezzék fel a hőmérsékletüket. A résztvevők minden jelentési időszakban jelentették a láz, köhögés, fáradtság, orrdugulás, zihálás, fejfájás, izomfájdalom és torokfájás tüneteit egy 0-tól (nincs) 3-ig (súlyos) terjedő skálán. A tüneti pontszámok 0-tól (minden tünet hiányzik) 24-ig (minden tünet súlyos) terjedtek. A fejfájást, torokfájást és izomfájdalmakat nem értékelték a <24 hónapos gyermekek esetében, mivel a szülők nem tudták megbízhatóan azonosítani ezeket a tüneteket. A dekongesztánsok, köhögéscsillapítók vagy lázcsillapítók használatát naponta jelentették.
A vizsgálatot eredetileg kétéves időszakra (2007-2008 és 2008-2009) finanszírozták, és 525 beteg felvételét és randomizálását tervezték. Ez a mintanagyság a becslések szerint 80%-os hatalmat biztosított a betegség időtartamának 0,6 napos csökkenésének és a vírusürítés 1,2 napos csökkenésének kimutatására azoknál az oseltamivirt kapóknál, akik a betegség kezdete után 48-119 órával kezdték meg a kezelést a placebóval szemben. Előre nem látható események miatt a toborzást 4 szezonra terjesztették ki, és a megcélzott mintanagyságot nem sikerült elérni. A második szezonban (2008-2009) a felvételt februárban felfüggesztették az oseltamivir-rezisztens influenzavírusok magas prevalenciája miatt. A 2008 és 2009 közötti beiratkozásokat kizárták ebből az elemzésből, és a leíró eredményeket külön tették közzé. 2009-2010-ben a H1N1 világjárvány október-novemberben tört ki, mielőtt a tanulmány készen állt volna a résztvevők felvételére; az influenza szinte teljesen megszűnt, miután a tanulmányba való felvétel december elején megkezdődött. 2010-2011-ben a finanszírozás lejárta miatt a szezon közepén felfüggesztették a beiratkozást. Ezt a vizsgálatot a Marshfield Clinic intézményi felülvizsgálati bizottsága hagyta jóvá, és regisztrálták a clinicaltrials.gov-on (NCT00555893).
A kezeléstől a kezelésig terjedő elemzéssel értékelték az eredményeket azon RT-PCR-rel megerősített influenzában szenvedő résztvevők körében, akiket a betegség kezdete után <120 órával véletlenszerűen egy kezelési csoportba soroltak, ≥1 adagot vettek be a kijelölt gyógyszerből, és ≥1 tüneti felmérést töltöttek ki. Minden elemzést a leleplezés előtt határoztak meg és rétegeztek a randomizáció/gyógyszeres kezelés megkezdése alapján a betegség időtartamához viszonyítva: korai kezelés (betegség időtartama <48 óra) és késői kezelés (betegség időtartama 48-119 óra). Kaplan-Meier-elemzéseket végeztek a tünetek megszűnéséig és a PCR-pozitivitásig eltelt idő vizsgálatára a randomizálás utáni 3-4. napon. A tünetek megszűnését úgy határozták meg, hogy az első olyan 24 órás időszak kezdetén következett be, amelyben a tünetek összpontszáma ≤2 volt, és egyetlen tünet sem volt enyhénél súlyosabb (≤1 tünetpontszám). A tünetek megszűnésének meghatározását az elemzés előtt kissé módosították az eredeti protokollhoz képest, amely nem vette figyelembe a teljes tüneti pontszámot. A tünetek megszűnéséig eltelt időt a randomizálástól a tünetek megszűnéséig 12 órás lépésekben számították ki. Az egyes kezelési csoportok túlélési görbéit log-rank tesztekkel hasonlítottuk össze, és a túlélés egyes időpontokban történő összehasonlítását a Klein és Moeschberger által leírt módszerekkel végeztük. Az eseményeket az utolsó bejelentett felmérési időszakban vagy a randomizálást követő 14 napon cenzorálták, attól függően, hogy melyik következett be előbb.
A randomizálás után a PCR-vizsgálathoz szükséges minták nem álltak rendelkezésre néhány résztvevőnél (n = 16), és néhányan (n = 4) többször is adtak mintát a randomizálás és a randomizálás utáni 3-4. nap között. A vírus kimutatásának értékeléséhez a 2 kezelési csoportban megvizsgáltuk az RT-PCR-pozitivitás becsült valószínűségét a randomizálást követő 3-4. napon. A résztvevőkhöz 3,5-ös értéket rendeltünk, ha a 3. vagy 4. napon negatív (sikertelen) vagy pozitív (cenzúrázott) PCR-eredményt kaptak. A 3-4. napon a PCR-pozitivitás valószínűségét a 3,5. időpontra vonatkozó túlélési függvény alapján számították ki.
A kezelésnek a szubjektív tünetek súlyosságára gyakorolt hatását a maximális és átlagos súlyossági pontszám segítségével értékelték. Az átlagos súlyossági pontszámot minden egyes résztvevőre úgy számították ki, hogy a randomizálástól a tünetek megszűnésének első időszakáig terjedő összes jelentési időszak tüneti súlyossági pontszámait összeadták, és elosztották a jelentési időszakok számával. A <24 hónapos gyermekeket (n = 5) kizártuk a betegség súlyosságának elemzéséből, mivel nem kértük őket arra, hogy minden tünetet jelentsenek.