INTRODUCERE

Iogurtul este un produs lactat preparat prin fermentarea laptelui cu Lactobacillus spp. În zilele noastre, proprietățile terapeutice, profilactice și nutriționale ale iaurtului sunt acceptate pe scară largă (Boor, 2001). Atunci când sunt administrate într-o cantitate suficientă, probioticele oferă beneficii pentru sănătate gazdei și cresc echilibrul microbian (Fuller, 1989; Guarner et al., 2005). Așadar, probioticele sunt microorganisme vii, nepatogene, prietenoase, care joacă roluri benefice în compartimentul microflorei gazdei (Schrezenmeir și de Vrese, 2001). Bacteriile acidului lactic (LAB) sunt cel mai important grup de microorganisme probiotice, în special Lactobacillus sp., Bifidobacterium sp. și Enterococcous sp. (Klein et al., 1998). Calitățile dietetice și terapeutice ale produselor lactate sunt determinate de microorganismele probiotice (Boor, 2001).

Iogurtul este o sursă potențială de Lactobacillus spp. probiotice. Iaurtul este, de asemenea, cunoscut ca fiind cel mai bogat aliment contaminant probiotic. Valoarea nutritivă a produsului lactat este crescută de microorganismele probiotice și de metaboliții produși ca urmare a fermentației. Consumul regulat de iaurt reduce grăsimea excesivă din ficat și sporește prin secreție. De asemenea, este necesar pentru cei care suferă de boli de inimă, ateroscleroză, hipertensiune și inflamații. Sucul gastric care este secretat prin acțiunea iaurtului duce la o capacitate digestivă ridicată. Efectul benefic al microorganismelor probiotice, în special Lactobacillus sp. care există în produsele lactate, care dovezi raportate în plus, mulți cercetători au studiat efectele microorganismelor probiotice împotriva organismelor patogene folosind diferite metode (Mercenier et al., 2003).

Lactobacilii sunt membri ai bacteriilor lactice al căror produs final primar de fermentare este acidul lactic. Acestea sunt bacterii importante din punct de vedere comercial, cu o mare varietate de aplicații atât în industria alimentară, cât și în cea nealimentară, datorită statutului lor de „general recunoscut ca fiind sigur” (GRAS). Lactobacilii au fost studiați extensiv pentru biologia lor moleculară în vederea îmbunătățirii caracteristicilor lor benefice specifice (Pouwels și Leer, 1993).

Modul de acțiune al probioticelor se bazează pe capacitatea bacteriilor probiotice de a lega agenții patogeni în țesutul epitelial intestinal. Acțiunea antipatogenă a probioticelor constă în producerea de acid lactic care scade pH-ul, interacționează cu toxinele produse de agenții patogeni cu producerea de peroxid de hidrogen și sinteza bacteriocinei (Corcionivoschi et al., 2010).

Un produs probiotic eficient necesită identificarea și caracterizarea corectă a unei specii bacteriene utilizate. Selecția organismelor probiotice care pot fi utile din punct de vedere terapeutic și nutrițional s-ar baza pe proprietăți specifice (Fuller, 1989; Quewand și Vesterlund, 2004).

Scopul acestei cercetări a fost de a colecta iaurt din diferite regiuni din Bangladesh și de a identifica lactobacilii prin PCR bacteriologică, precum și prin PCR specifică genului și de a analiza proprietățile lor probiotice în urma interferenței cu creșterea bacteriilor patogene.

MATERIALE ȘI METODE

Colectarea probelor și izolarea bacteriilor acidului lactic (LAB): Două tipuri de probe de iaurt au fost colectate din diferite supermagazine din orașele Chittagong și Bogra din Bangladesh, care aveau un gust acru (probele M1, M2 și M3) și dulce (proba S2). Apoi, probele au fost depozitate imediat după colectare în frigider la temperaturi scăzute (4°C), în mod aseptic, pentru a le proteja de contaminare și deteriorare. Lactobacillus spp. a fost izolat din probele de iaurt prin diluții adecvate cu soluție de sare 0,9%. Pentru cultivarea organismului au fost utilizate mediile MRS (Man, Rogosa și Sharpe) și MRS (Man, Rogosa și Sharpe) agar agar. pH-ul mediilor a fost ajustat la 6,5. Plăcile au fost incubate aerob la 37°C timp de 48 de ore. În cele din urmă, s-a izolat o singură colonie de Lactobacillus prin observarea morfologiei coloniei și a unor teste biochimice, cum ar fi colorarea Gram, testul catalazei și al oxidazei. Coloniile bine izolate au fost prelevate și transferate în bulion MRS pentru îmbogățirea Lactobacillus la 37°C.

Identificarea bacteriilor acidului lactic (LAB) prin analiză bacteriologică: Identificarea a fost efectuată în conformitate cu metodele descrise în Bergeys manual of systemic bacteriology. Fără utilizarea condițiilor anaerobe, toate tulpinile au crescut bine pe agar MRS la 37°C timp de 48 h pentru creșterea selectivă a lactobacililor. Din diluțiile corespunzătoare a fost aleasă o colonie reprezentativă și a fost identificată provizoriu ca lactobacili după reacția de colorare Gram, aspectul coloniei, morfologia celulară, testul catalazei, testul oxidazei, testul indolului, testul roșu de metil, testul voges-proskauer, testul de utilizare a citratului și modelele de fermentare a carbohidraților, așa cum sunt delimitate de manualul Bergeys (Hensyl, 1994).

Extragerea ADN-ului din izolate: ADN-ul a fost extras din 4 probe izolate din iaurt conform metodei clasice de decongelare la căldură (Salehi et al., 2005). Cultura bacteriană pură din pânza de agar MRS a fost subcultivată în mediu de bulion MRS, din care 1,5 ml de cultură de bulion a fost luată în tub eppendorf și centrifugată la 10.000 rpm timp de 5 min. După aceea, supernatantul a fost eliminat și s-a colectat peletul. Aproximativ 200 μL de apă deionizată autoclavată a fost adăugată la granule și dizolvată prin agitare cu degetul. Capacul tubului eppendorf a fost străpuns cu un ac steril și apoi tubul a fost fiert în baie de apă la 100°C timp de 10 min. Imediat după fierbere, tubul eppendorf a fost ținut în gheață timp de 10 min și apoi centrifugat la 10.000 rpm timp de 10 min. Apoi s-au colectat 100-150 μL de supranatant care conține ADN cromozomial bacterian.

Amplificare PCR specifică genului: Pentru a determina afilierea la nivel de gen a tuturor celor 4 izolate, s-a efectuat PCR cu setul de amorsă specifică genului Lactobacillus LbLMA1-rev (5′-CTCAA AACTAAACAAAGTTTC-3′) și R16-1 (5′-CTTGTACACACACACCG CCCGTCA-3′) conceput de Dubernet et al. (2002). Analiza PCR a fost efectuată pe baza regiunii de spațiere intergenică a ARN ribozomal 16-23S, așa cum a fost descrisă anterior (Dubernet et al., 2002).

Mestecul de reacție (20 μL) conținea 1 μL (100 ng μL1) din fiecare primer adăugat cu 10 μL 10× PCR Master Mix, 6 μL de apă PCR și 2 μL de șablon. Condițiile de testare au fost denaturarea inițială la 95°C timp de 5 minute, urmată de 30 de cicluri constând în denaturare la 95°C timp de 30 de secunde, aneantizare la 55°C timp de 30 de secunde, prelungire la 72°C timp de 30 de secunde și o etapă finală de prelungire de 7 minute la 72°C. Produsele au fost păstrate la 4°C până la analiză. Produsele amplificate au fost supuse electroforezei în geluri de agaroză 1% în tampon TAE (40 mM Tris acetat, 1 mM EDTA, pH 8,2). Gelurile au fost colorate cu bromură de etidiu (5 μg mL1) și vizualizate sub transiluminator UV (Biometra GmBH, Germania).

Analiză a caracteristicilor probiotice: Caracteristicile probiotice au fost determinate prin analizarea următoarelor teste.

Test de toleranță la NaCl: Pentru determinarea toleranței la NaCl, lactobacilii izolați au fost crescuți în bulion MRS conținând nouă eprubete care au fost ajustate cu diferite concentrații de NaCl (1-9%). După autoclavare timp de 15 min la o presiune de 15 Ibs la 121°C, fiecare eprubetă a fost inoculată cu 10 μL de cultură peste noapte de Lactobacillus și incubată anaerob la 37°C timp de 24 h. După 24 h de incubare, creșterea bacteriană a fost măsurată cu ajutorul unui spectrofotometru la 560 nm (Graciela și Maruia, 2001).

Test de toleranță la sărurile biliare: Rata de creștere a culturilor bacteriene a fost determinată în bulion MRS care conține diferite niveluri (0,05, 0,1, 0,15, 0,3 și 0,5%) de săruri biliare. Culturile proaspăt preparate au fost inoculate (1%) în mediu și incubate la 37°C timp de 24 de ore în condiții anaerobe. Apoi, densitatea optică a fiecărei probe a fost măsurată cu ajutorul unui spectrofotometru la 560 nm (Graciela și Maruia, 2001).

Determinarea pH-ului optim pentru creștere: Pentru determinarea pH-ului optim pentru creștere, 100 μL de cultură proaspătă de Lactobacillus peste noapte au fost inoculate în eprubete conținând bulion MRS cu pH variabil, variind între 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5 și 8,0. Pentru a determina efectul pH-ului asupra creșterii s-a folosit tamponul de acetat (pH -4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5), tamponul Tris-HCl (pH-7) și tamponul de borat (pH-8). Bulionul inoculat a fost incubat în condiții anaerobe timp de 24 de ore la 37°C. După incubare, creșterea bacteriilor a fost măsurată cu ajutorul unui spectrofotometru la 560 nm față de bulionul de control neinoculat.

Cantificarea acidului organic și determinarea valorii pH-ului: În conformitate cu Hoque et al. (2010), s-a efectuat cuantificarea acizilor organici produși de către izolate și determinarea valorilor pH-ului acestora. Bulionul MRS suplimentat cu 10% lapte degresat inoculat cu 1% (v/v) sau 100 μL de cultură overnight a izolatelor și incubat în condiții anaerobe la 37°C timp de 72 h. Probele fermentate au fost colectate la fiecare 24, 48 și 72 h, iar lichidele din laptele coagulat au fost separate prin filtrare. După filtrare, pH-ul lichidului separat a fost înregistrat cu ajutorul unui pH-metru cu electrod digital, iar cuantificarea acidului organic s-a realizat prin titrare cu NaOH 0,1 N, folosind fenoftalină ca indicator de pH (Hoque et al., 2010).

Cercetarea interferenței cu bacteriile patogene: Activitățile antibacteriene ale Lactobacillus spp. izolate, împotriva unor bacterii patogene au fost determinate prin metoda modificată de suprapunere pe agar (Aween et al., 2012). Opt agenți patogeni umani diferiți, Shigella dysenteriae, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus megaterium, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae, Escherichia coli și Shigella sonnei au fost utilizați în acest studiu ca agenți patogeni de testare. Activitatea antibacteriană a fost caracterizată în continuare prin determinarea dacă este bacteriostatică sau bactericidă. Testul a fost efectuat prin tamponarea zonei de inhibiție a creșterii. Tamponul a fost strecurat pe o placă de agar nutritiv și incubat aerob la 37°C timp de 72 h. Prezența creșterii în placa de agar nutritiv a fost interpretată ca o activitate inhibitoare, adică bacteriostatică, în timp ce absența creșterii a fost interpretată ca fiind bactericidă.

REZULTATE ȘI DISCUȚII

Identificarea bacteriilor prin teste bacteriologice și biochimice: Cele patru izolate au fost cultivate în mediul Man, Rogosa și Sharpe (MRS) la pH 6,5. Toate izolatele au fost produse mici, neregulate și de formă rotundă, cu o culoare albicioasă strălucitoare, cremoasă sau maronie, care au fost similare din punct de vedere morfologic cu Lactobacillus spp.

Apoi toate izolatele au fost examinate la microscopul cu câmp luminos pentru a observa caracteristicile lor microscopice. Aceste izolate s-au dovedit a fi bacterii gram pozitive, cu formă de bastonaș scurt și mediu, care nu formează spori (Fig. 1a-d), ceea ce indică faptul că sunt membre ale Lactobacillus spp. (Thamaraj și Shah, 2003).

În plus, au fost efectuate unele teste biochimice, cum ar fi testul catalazei, testul oxidazei, testul indolului, testul roșu de metil (MR), testul Voges Proskauer (VP), testul de utilizare a citratului și modelele de fermentare a carbohidraților, așa cum sunt delimitate de manualul Bergeys de bacteriologie sistematică (Hensyl, 1994).

Soldații au fost găsiți negativi la catalază și oxidază, iar la testele IMViC (indole, methyl-red, voges proskauar, citrate utilization) toți izolații au fost, de asemenea, găsiți negativi, astfel încât acestea ar putea confirma că izolații sunt Lactobacillus spp. (Dhanasekaran et al., 2010).

În acest studiu, toate cele patru izolate au fost capabile să fermenteze 11 carbohidrați diferiți, adică glucoză, zaharoză, fructoză, lactoză, xiloză, riboză, galactoză, maltoză, manitol, ramnoză și dextroză, ceea ce indică faptul că acestea sunt capabile să crească în diverse habitate utilizând diferite tipuri de carbohidrați. Rezultatele sintetizate ale tuturor testelor bacteriologice și biochimice sunt prezentate în tabelul 1. Toate aceste rezultate sunt considerate relevante pentru constatările lui Chowdhury et al. (2012).

Identificare moleculară prin PCR specifică genului: În acest studiu, am folosit un primer specific genului pregătit prin analiza similitudinilor dintre secvențele de nucleotide ale regiunii de spațiere dintre genele ARN ribozomal 16 și 23S ale Lactobacillus (Dubernet et al., 2002). Specificitatea acestui primer specific genului combinat cu un primer universal a fost testată față de 23 de tulpini de Lactobacillus de origine variată. Produsele PCR au fost trecute prin electroforeză pe gel în agaroză 1% și vizualizate cu ajutorul transiluminatorului UV. Pentru fiecare probă (M1, M2, M3 și S2) a fost găsită o bandă ascuțită de 200 pb, care corespunde regiunii de spațiere intergenică a ARNr 16-23S a Lactobacillus spp. (Dubernet et al., 2002). Astfel, toate cele 4 izolate au fost confirmate la nivel de gen ca fiind Lactobacillus spp. Controlul negativ fără șablon nu a dat nici o bandă, ceea ce sugerează că toate cele 4 produse PCR erau corespondente ADN-ului șablon (Fig. 2).

Analiză a caracteristicilor probiotice: Bacteriile probiotice produc o varietate de substanțe cu proprietăți antibacteriene, inclusiv acid organic, H2O2, bacteriocine care afectează metabolismul bacterian sau producția de toxine (Rafter, 2003; Rolfe, 2000; Vandenbergh, 1993).

Pentru a face acest lucru, trebuie să fie capabili să reziste condițiilor nefavorabile din intestin, cum ar fi NaCl și sarea biliară.

Testul de toleranță la NaCl: Izolatul Lactobacillus spp. din iaurturi a fost capabil să tolereze 1-9% NaCl. Pentru a determina toleranța la NaCl a izolatelor, densitatea optică a fost măsurată la 560 nm și datele au fost reprezentate grafic. Izolații M1, M2, M3 și S2 au crescut bine în concentrație de 1% NaCl. Creșterea maximă (OD) a izolatelor M1, M2, M3 și S2 a fost de 1,420, 2,143, 1,662 și, respectiv, 2,207, în 1% NaCl (Fig. 3). Toleranța ridicată la sare este o proprietate dezirabilă pentru organismele care urmează să fie utilizate ca probiotice.

Se știe că NaCl este o substanță inhibitoare care poate inhiba creșterea anumitor tipuri de bacterii. În acest studiu, rezultatele au arătat că Lactobacillus spp. izolate din iaurturi au fost capabile să tolereze 1-9% de NaCl, iar creșterea optimă a fost observată la 1-5% NaCl (Hoque et al., 2010).

Testul de toleranță la săruri biliare: Lactobacillus spp. izolat, a fost capabil să supraviețuiască în 0,05, 0,1, 0,15 și 0,3% acid biliar. Lactobacillus spp. izolat, a fost, de asemenea, capabil să se înmulțească în concentrațiile de acid biliar menționate mai sus. Densitatea optică a fost măsurată la 560 nm și datele au fost reprezentate grafic. Toate izolatele se dezvoltă bine în concentrația de sare biliară de 0,05%. Creșterile maxime (OD) ale izolatelor M1, M2, M3 și S2 au fost de 1,741, 2,213, 1,758 și, respectiv, 2,125. Rata de creștere a scăzut odată cu creșterea nivelului concentrației de sare biliară (Fig. 4).

În acest experiment s-a folosit o concentrație de 0,05-0,3% de bilă care se poate găsi în tractul intestinal uman și concentrația maximă de bilă care este prezentă la omul sănătos este de 0,3% (Graciela și Maruia, 2001). S-a raportat că, înainte de a selecta o bacterie probiotică pentru consumul uman, aceasta trebuie să fie tolerabilă la o concentrație biliară de 0,3% (Gilliland et al., 1984). Pe baza rezultatului, se sugerează că, aceste tulpini pot fi potențiale pentru a fi utilizate ca organisme probiotice, deoarece toate izolatele au fost rezistente și capabile să se dezvolte în concentrație de sare biliară de 0,3%.

Determinarea pH-ului optim pentru creștere: Lactobacillus spp. izolate, din iaurturi au fost capabile să crească până la intervale de pH cuprinse între 4,0-8,0. Densitatea optică a fost măsurată la 560 nm și datele au fost reprezentate grafic. Creșterea maximă (OD) a izolatelor M1, M3 și S2 a fost de 2,201, 2,0619 și, respectiv, 2,237 la pH 6,0, în timp ce creșterea maximă a izolatei M2 a fost de 2,259 la pH 6,5 (Fig. 5). Izolații au fost capabili să se dezvolte la un pH cuprins între 4,0 și 8,0, dar creșterea optimă a fost observată la un pH cuprins între 5,0 și 6,5 atunci când au fost crescuți în bulion MRS la 37°C. Din acest studiu se poate concluziona că rata de creștere a Lactobacillus spp. scade într-un anumit stadiu atunci când crește concentrația pH-ului (Chowdhury et al., 2012).

Cantificarea acidului organic și determinarea valorii pH-ului: Pentru cuantificarea acidului organic, s-a folosit metoda titrării.

Cantificarea acidului organic = V×N×D

unde, V este volumul de NaOH, N este puterea NaOH și D este factorul de diluție. Rezultatul producției de acid organic este prezentat în tabelul 2.

Acest studiu indică faptul că producția de acid organic a crescut odată cu timpul de incubare, dar, în același timp, pH-ul mediului a scăzut odată cu creșterea producției de acid. Din rezultatul (tabelul 2) s-a observat cea mai mare aciditate (1,9%) și cel mai mic pH 3,64 după 72 h de incubare la 37°C pentru probioticul Lactobacillus izolat din iaurtul Bogra. Alte bacterii probiotice izolate din iaurt din diferite supermarketuri din Chittagong au prezentat cea mai mare aciditate (1,83, 2,11 și 2,11%) și cel mai mic pH (3,9, 3,68 și, respectiv, 3,65) după 72 de ore de incubare.

Există o variație minoră în producția de acid organic de către lactobacili datorită diferențelor regionale ale acestora, ceea ce indică faptul că aceste izolate sunt ușor dependente de climă și mediu (Hoque et al., 2010).

Cercetarea interferenței cu bacteriile patogene: Probioticele, inclusiv Lactobacillus, Bifidobacterium și Streptococcus spp. sunt cunoscute ca fiind inhibitorii pentru creșterea unei game largi de agenți patogeni intestinali la om. În plus față de efectele favorabile împotriva bolilor cauzate de un dezechilibru al microflorei intestinale, mai multe observații experimentale ale bacteriilor împotriva dezvoltării tumorilor de colon sunt raportate de Dunne et al. (2001) și Wollowski et al. (2001).

În acest studiu, cele 4 izolate selectate au fost examinate în funcție de activitatea lor antibacteriană împotriva diferitelor bacterii patogene, cum ar fi Shigella dysenteriae, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus megaterium, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae, Escherichia coli și Shigella sonnei asociate cu bolile de origine alimentară. Comparația inhibiției lor (în mm) împotriva a 8 agenți patogeni de testare este prezentată în tabelul 3.

Rezultatele experimentale au arătat că cea mai mare activitate inhibitorie a izolatului M1 a fost demonstrată împotriva Bacillus cereus (51,20±1,22 mm) și cea mai mică zonă de inhibiție a fost (23,46±1,00 mm) împotriva Shigella sonnei după 72 h de incubare. Cel mai mare diametru al zonei de inhibiție a izolatului M2 a fost demonstrat împotriva E. coli (38,43±1,00 mm) și cea mai mică zonă (20,10±1,00 mm) împotriva Bacillus megaterium după 72 de ore de incubare. În mod similar, cel mai mare diametru al zonei de inhibiție a izolatului M3 a fost înregistrat împotriva P. aeruginosa (42,90±1,20 mm) și cea mai mică zonă (17,83±1,10 mm) împotriva S. aureus. Și, în cele din urmă, la izolatul S2, cea mai mare zonă a fost observată împotriva E. coli (43,80±1,20 mm) și cea mai mică zonă (21,63±1,10 mm) împotriva S. aureus după 72 h de incubare. Rezultatele legate de Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus megaterium, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae și Escherichia coli au fost considerate relevante pentru constatările lui Chowdhury et al. (2012).

În studiul de față, izolatele M1, M2, M3 și S2 au prezentat rezultate satisfăcătoare în ceea ce privește activitatea bacteriocidă și bacteriostatică. Izolatul M1 a fost bactericid pentru Bacillus megaterium, Vibrio cholera, Shigella sonnei și bacteriostatic pentru Shigella dysenteriae, Bacillus cereus, P. aeruginosa, S. aureus și E. coli. Izolatul M2 a fost bactericid pentru Bacillus cereus, Shigella sonnei și bacteriostatic pentru Shigella dysenteriae, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus megaterium, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae, Escherichia coli. Izolatul M3 a fost bactericid pentru Shigella dysenteriae, Bacillus megaterium și Staphylococcus aureus și bacteriostatic pentru Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Vibrio cholerae, Escherichia coli și Shigella sonnei, iar izolatul S2 a fost bactericid pentru Shigella dysenteriae, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae și Shigella sonnei și bacteriostatic pentru Bacillus megaterium și Escherichia coli.

CONCLUZIE

În acest studiu, Lactobacillus spp, au fost izolate și identificate din iaurturi regionale selective. Pentru identificarea bacteriilor au fost efectuate mai multe teste bacteriologice și biochimice. Pe lângă acestea, a fost efectuată o PCR folosind primeri specifici genului (LbLMA-rev) și universali (primer R16-1) care corespund regiunii de spațiere intergenică 16-23S rRNA a Lactobacillus spp. pentru a confirma identificarea bacteriologică. Lactobacillus spp. izolate au fost capabile să tolereze substanțe inhibitoare precum NaCl (1-9%) și sarea biliară (0,05-0,3%) și, de asemenea, au fost capabile să supraviețuiască în condiții alcaline (pH 8,0). Toate aceste izolate (M1, M2, M3 și S2) au fost capabile să utilizeze carbohidrați cum ar fi glucoza, xiloza, zaharoza, fructoza, galactoza, lactoza, maltoza, riboza, ramnoza, manitolul și dextroza. În plus, Lactobacillus spp. izolate din toate cele 4 izolate (M1, M2, M3 și S2) au fost capabile să producă acid organic în lapte. Această investigație indică faptul că există o variație minoră în producția de acid organic de către Lactobacillus din cauza variației regionale a acestora. Prezența activităților antibacteriene ale tuturor celor 4 izolate (M1, M2, M3 și S2) împotriva a opt bacterii patogene umane comune a fost considerată satisfăcătoare, iar izolatele produc bacteriocine pe cale extracelulară. Un probiotic trebuie să fie capabil să inhibe organismele patogene și ar trebui să poată tolera condițiile dificile din intestinul uman, cum ar fi un nivel ridicat de sare, un pH scăzut și o concentrație ridicată de săruri biliare. Toate speciile de Lactobacillus spp. izolate au îndeplinit aceste criterii și, prin urmare, pot fi considerate potențiale probiotice pentru sănătatea umană.

.